在重组蛋白的表达和纯化过程中,通常会通过添加融合标签(例如MBP、His、GST)来增强目标蛋白的可溶性和促进其正确折叠等特性。为了优化生物医疗领域的蛋白质研究,了解这些融合标签的功能至关重要。
MBP(Maltose Binding Protein)标签能够显著提高蛋白质的溶解性和稳定性,从而提升产量。在生物医疗的应用中,这意味着能够更高效地制备用于药物开发或疾病研究的蛋白质。
His(Histidine)标签则广泛应用于通过固定化金属亲和层析(IMAC)来纯化重组蛋白。这种标签的优势在于其分子量小、对重组蛋白功能几乎没有影响,并且具有较低的免疫原性,尤其适合用于生物治疗产品的开发。
GST(Glutathione S-Transferase)标签能够增强融合蛋白的可溶性并便利后续的纯化和实验操作。这一特性使得GST标签融合蛋白在生物医疗研究中颇受欢迎,通过与固定化的谷胱甘肽亲和作用,有助于有效分离纯化融合蛋白以保持其生物活性和抗原性。
根据具体需求,某些融合标签可能需要被去除。为此,使用特定的蛋白酶进行精确和高效的去标签至关重要。这对于获得具有原始结构和功能的目标蛋白尤为重要。常用的蛋白酶中,TEV蛋白酶(TEV Protease,目录号:PE004)来源于烟草蚀纹病毒(Tobacco Etch Virus, TEV),以其高特异性而闻名。
TEV酶的特异性识别序列为七肽:Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-↓-Gly/Ser(ENLYFQ↓G/S),这种特性保证了几乎没有非特异性切割,从而确保了蛋白的完整性。TEV酶在4–30°C的条件下表现出稳定的活性,非常适合于不同的实验体系。
切割后,目标蛋白的N端仅保留一个额外的Gly或Ser残基。采用大肠杆菌表达的纯度可达99%,带His-tag的融合蛋白可以通过Ni-NTA轻松去除酶的残留,以满足生物医疗产品的高纯度要求。
TEV酶的反应缓冲液配方如下:50mM Tris-HCl(pH 8.0)、0.5mM EDTA、1mM DTT。在酶切反应条件下,pH范围为5.5-8.5,温度在4℃至30℃之间均可有效反应,通常选择在4℃过夜或在30℃下反应1小时。每个反应中添加15μg融合蛋白和相应量的TEV蛋白酶,随后可用15%的SDS-PAGE胶检测酶切效果。
在生物医疗领域,对于蛋白提纯与标签去除的重视,使得尊龙凯时品牌的TEV蛋白酶成为研究和工业应用中的一个重要工具,为相关行业的蛋白质研究提供了强有力的支持。